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43 : Bandelette multitest API-20E - Biologie


Objectifs d'apprentissage

  • Apprenez à réaliser et à interpréter la technique miniaturisée et multi-tests pour l'identification bactérienne

API - BANDE D'ESSAI 20E

Cette bandelette de test API-20E (de bioMérieux, Inc.) est utilisé pour identifier les bâtonnets entériques à Gram négatif (bien que l'API fabrique une variété d'autres bandelettes de test pour la levure, Staphylocoque, anaérobies, etc.) 20 compartiments de test séparés se trouvent sur la bandelette, tous déshydratés. Une suspension bactérienne est utilisée pour réhydrater chacun des puits. Certains puits présenteront des changements de couleur dus aux différences de pH : d'autres produisent des produits finaux qui doivent être identifiés avec des réactifs. Un numéro de profil est déterminé à partir de la séquence de + et des résultats de test, puis recherché dans un livre de codes ayant une corrélation entre les nombres et les espèces bactériennes.

LES MATÉRIAUX NÉCESSAIRES

  • plaques de gélose d'espèces bactériennes
  • Solutions à 0,85% de NaCl (5 ml)
  • pipettes Pasteur stériles + bulbes
  • huile minérale stérile
  • Bandelette de test API 20E (pour oxydase - bâtonnets Gram négatif)
  • Chambre d'incubation de bandelettes de test API APRÈS INCUBATION : 10 % FeCl3, réactifs de Barrett
  • A et B, réactif de Kovac

LES PROCÉDURES

Préparer une suspension des bactéries dans le tube salin

  1. Inoculer une grande colonie (2-3 mm de diamètre) de la bactérie (une jeune culture pure) dans la solution à 0,85% de NaCl.
  2. Assurez-vous que la suspension est homogène et sans amas de bactéries flottantes.

Inoculer la bandelette API

  1. En tenant la bandelette légèrement inclinée par rapport au dessus de la table, vous allez maintenant inoculer la suspension bactérienne dans chaque puits avec la pipette stérile.
  2. Touchez l'extrémité de la pipette sur le côté de la cupule, permettant à l'action capillaire d'aspirer le liquide dans le puits tout en pressant lentement la poire. Cela devrait éliminer toute formation de bulles dans les puits. Chaque puits doit être rempli jusqu'au col (voir schéma).
  3. CIT, VP et GEL ont des cases autour de leurs noms. Ces puits d'essai seront remplis jusqu'au sommet du puits.
  4. LDC, ODC, ADH, H2S et URE sont remplis comme décrit à l'étape B, mais ils seront ensuite remplis jusqu'au sommet avec de l'huile minérale stérile.

Incuber la bandelette dans sa chambre

  1. Le fond de la chambre d'incubation a de petits puits échancrés dans le fond : remplissez-le d'eau juste assez pour remplir ces échancrures (environ 5 ml).
  2. Placez la bande dans ce fond. Il ne devrait pas y avoir tellement d'eau qu'elle tombe sur la bande API.
  3. Placez le haut de la chambre d'incubation sur le fond et étiquetez-le.
  4. Placer la bande à 37º C pendant 18-24 heures.

INTERPRÉTATION

  1. Ajoutez les réactifs appropriés dans les compartiments :
    • 1 goutte de Kovac à l'IND (lire en quelques minutes)
    • 1 goutte de Barritt's A et B à VP (la réaction a + peut prendre jusqu'à 10 minutes)
    • 1 goutte de FeCl3 à TDA
  2. Lisez tous les autres tests comme décrit (tableau ci-dessous) sans réactifs.
  3. Notez les résultats sur le diagramme qui vous est remis en laboratoire (1, 2 ou 4 points pour + réaction, 0 point pour - réaction). La réaction du test d'oxydase doit être négative et est ajoutée comme dernier résultat du test.
  4. Trois réactions de test sont additionnées à la fois pour donner un nombre à 7 chiffres, qui peut ensuite être recherché dans le livre de codes.

Noter

Des tests supplémentaires tels que la motilité, la croissance sur gélose MacConkey, la réduction des nitrates et le glucose O-F peuvent augmenter les chances d'une bonne identification. Votre instructeur peut vous faire courir ou non. Les tests de base sont vraiment tout ce qui est absolument nécessaire pour une identification.

DES QUESTIONS

  1. A quoi sert l'eau dans le bac ?
  2. Quelle est la fonction de l'huile minérale?
  3. Quels sont les avantages de ce test (par rapport aux milieux de tubes biochimiques classiques) ?
  4. Quels sont les inconvénients de ce test ?

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Le test API pour les bactéries comme illustré ci-dessus est un kit de 20 tests jumbo pour panel biochimique pour l'identification et la différenciation des membres de la famille des entérobactéries. API signifie Analytical Profile Index. Il s'agit d'un kit de test API 20E qui est rapide, sûr et facile à réaliser et c'est donc une méthode bien établie pour l'identification manuelle des micro-organismes au niveau de l'espèce. Des kits de test API modifiés sont également disponibles pour l'identification de micro-organismes couvrant les bactéries et levures Gram positif et Gram négatif. Les bandelettes API donnent des identifications précises basées sur de vastes bases de données et sont des systèmes de test standardisés et faciles à utiliser. Mais ici, nous nous occupons du kit de test API 20E.

Principe du test APT pour les bactéries

Le test API pour les bactéries (kit de test API 20E) permet d'identifier et de différencier les bactéries de la famille des entérobactéries sur la base de tests biochimiques.
La gamme API propose une version standardisée et miniaturisée des techniques d'identification existantes, jusqu'alors compliquées à mettre en œuvre et difficiles à lire. Dans l'API 20E, la bande en plastique contient vingt mini-chambres de test contenant des milieux déshydratés ayant des compositions chimiquement définies pour chaque test. Ils détectent généralement une activité enzymatique, principalement liée à la fermentation des glucides ou au catabolisme des protéines ou des acides aminés par les organismes inoculés.

Une suspension bactérienne est utilisée pour réhydrater chacun des puits et les barrettes sont incubées. Pendant l'incubation, le métabolisme produit des changements de couleur qui sont soit spontanés, soit révélés par l'ajout de réactifs. Tous les résultats de test positifs et négatifs sont compilés pour obtenir un numéro de profil, qui est ensuite comparé aux numéros de profil dans un livre de codes ou un journal de bord commercial (ou en ligne) pour la détermination et l'identification de l'espèce bactérienne.


Résultats et interprétation

  1. Pour certains compartiments, vous pouvez juste lire le changement de couleur tout de suite après 24 heures mais pour certains, vous devez mettre des réactifs avant la lecture.
  2. Ajoutez les réactifs suivants à ces compartiments spécifiques
    1. TDA : Mettez une goutte de chlorure ferrique
    2. IND : Mettre une goutte de réactif kovacs
    3. VP : Mettez une goutte de KOH à 40 % (VP reagent 1) & Une goutte de VP Reagent 2 (α-Naphtol) (il faut attendre 10 minutes avant de dire que c'est négatif).
    1. Marquez chaque test comme positif ou négatif sur le couvercle du plateau
    2. Les puits sont délimités en triplets par des triangles noirs, pour lesquels les scores sont attribués comme suit :
    1. Le profil pour cette combinaison de réactions est donc 7031645 (code à 7 chiffres)
    2. Identifier l'organisme en utilisant Catalogue d'API ou apiweb
      VIDÉO : Lecture d'un API20E à l'aide de la base de données en ligne
    3. Identifier l'organisme à l'aide de l'APIla toile:
      1. Démarrez Internet Explorer ou le navigateur Web Firefox
      2. Rendez-vous sur : https://apiweb.biomerieux.com
        1. Login : votre nom d'utilisateur
        2. Mot de passe : votre mot de passe
        3. Sélectionnez le bon test (par exemple API 20E).
        4. Entrez le profil numérique pour obtenir l'identité.
        5. Enregistrez l'identité avec les commentaires (% ID et valeur T) sur la feuille de résultats.

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        CARACTÉRISTIQUES DE L'API et SPÉCIFICATIONS

        Pour les applications de santé, API propose :

        Identification à Gram négatif API

        • API 20E &ndash 18-24 heures d'identification des entérobactéries et d'autres bactéries à Gram négatif non exigeantes
        • API Rapid 20E et identification en 4 heures des entérobactéries
        • API 20NE &ndash Identification en 24 à 48 heures des non-entérobactéries Gram négatif
        • API NH &ndash Identification en 2 heures de Neisseria Haemophilus et Branhamella catarrhalis

        Identification à Gram positif API

        • API Staph &ndash Identification pendant la nuit des staphylocoques et microcoques cliniques
        • RAPIDEC® Staph &ndash Identification en 2 heures des staphylocoques courants
        • API 20 Strep &ndash Identification en 4 ou 24 heures des streptocoques et des entérocoques
        • API Coryne &ndash Identification en 24 heures des corynebactéries et des organismes de type coryne

        Identification anaérobie API

        • API 20A et identification 24 heures sur 24 des anaérobies
        • Identification rapide 32A et identification en 4 heures des anaérobies
        • API 50 CH &ndash Performance des tests de métabolisme des glucides
        • API ZYM &ndash Semiquantification des activités enzymatiques

        Pour les applications de sécurité des produits, API propose :

        Identification à Gram négatif API

        • API 20E &ndash Identification des espèces/sous-espèces d'entérobactéries et identification des groupes/espèces de bactéries Gram négatives non fermentantes
        • API Rapid 20E et identification en 4 heures des entérobactéries
        • API 20NE &ndash Identification en 24 à 48 heures des non-entérobactéries Gram négatif
        • API Campy &ndash Identification 24 heures sur 24 des espèces de Campylobacter

        Identification à Gram positif API

        • API Staph &ndash Identification pendant la nuit des staphylocoques et microcoques cliniques
        • API 20 Strep &ndash Identification en 4 ou 24 heures des streptocoques et des entérocoques
        • API Coryne &ndash Identification en 24 heures des corynebactéries et des organismes de type coryne
        • API Listeria &ndash Identification 24 heures sur 24 de toutes les espèces de Listeria

        Identification anaérobie API

        • API 20A et identification 24 heures sur 24 des anaérobies
        • Identification rapide 32 A &ndash 4 heures d'identification des anaérobies
        • API 20C AUX &ndash Identification des levures en 48 à 72 heures
        • ID 32 C &ndash Identification des levures sur 24 heures
        • API 50 CH &ndash Performance des tests de métabolisme des glucides
        • API CHL Medium &ndash Identification de Lactobacillus
        • API CHB Medium &ndash Identification de Bacillus
        • API ZYM® &ndash Semiquantification des activités enzymatiques
        • Test de CQ du réactif API 20E et performances des tests de CQ pour le chlorure ferrique, l'alpha-naphtol, l'acide sulfaninique, la NN-Diméthyl-Alpha-Naphtylamine et le réactif Kovac's
        • Kit McFarland et normes pour McFarland 0.5, 1, 2, 3, 4, 5


        Voir la vidéo: Testing an Antibiotic Using a Disk Diffusion Assay - Kirby Bauer Method (Janvier 2022).